在今年的AGBT大会上，Illumina公司也发布了一款NeoPrep文库制备系统据Illumina网站介绍，这款仪器采用数字微流体技术，实现了按键式的文库制备它能够明显简化TruSeq和Nextera文库制备流程步骤更少，出错机会更少，也就意味着重复性更高NeoPrep还能与Illumina的基因组计算环境BaseSpace整合，提供从样品制备。
现在我们就以illumina经典的 TruSeq Stranded mRNA 建库测序为例来走一遍整个illumina测序的流程，为什么会选择这个建库策略呢 首先，RNAseq是目前我们触手可及应用最广的基因表达量检测技术其次，相较之于链非特异性测序，链特异性测序对大多数人来说更复杂，更难以理解 关于链特异性测序我。
第一种，Illumina公司的Truseq DNA建库方法因为Illumina Truseq DNA建库试剂盒当中，它所提供的接头上的C碱基都是已经经过甲基化修饰了所以，用这些接头做出来的文库，在用亚硫酸氢盐做转化的过程当中，它的接头上的C还是保持是C ，不会被转成U带了这些接头的文库分子，就可以和测序芯片上。
而3#39端转录组测序技术，如Smartseq2，与全mRNA测序技术不同，它通过磁珠上的预锚定序列，如Truseq Read1BarcodeUMI和PolyT，实现了单细胞的高效标记与混样与全长测序相比，这种方法只保留部分mRNA 3#39端信息，精确聚焦在单细胞研究中10X genomics的官网提供了详尽的技术支持，深入解析了这一。
您好，calling在这里是识别的意思，除了variant calling识别变体，还有genotype calling识别基因型base calling识别碱基等可以参考以下文献的中英版本Mapping short DNA sequencing reads and calling variants using mapping quality scores Genome Res H Li J Ruan R Durbin。
